1、实验目的

硝酸盐含量成为鉴定蔬菜及其加工品品质的重要指标。本实验目的是以农贸市场主要蔬菜为实验对象，掌握硝态氮含量测定原理及方法，为蔬菜食用安全提供依据。

2、实验方法原理

在强酸条件下NO3－与水杨酸反应，生成硝基水杨酸。在碱性条件下（pH＞12）呈黄色，在一定范围内，其颜色的深浅与含量成正比，可直接用分光光度计测定。

#水杨酸#

3、主要仪器设备

分光光度计；电子分析天平；10mL、20mL刻度试管；移液管；25mL容量瓶；小漏斗（ф5cm）；玻棒；洗耳球；电炉；铝锅；玻璃泡；13.7cm定量滤纸若干。

分光光度计电子分析天平10mL、20mL刻度试管小漏斗13.7cm定量滤纸

4、材料、试剂

实验材料为农贸市场主要蔬菜的叶片若干。

10μg·mL－1 NO3―-N标准母液配制：精确称取烘至恒重的KNO30.1444g，溶于蒸馏水中，定容至200mL（即为100μg·mL－1 NO3―-N溶液）。然后再吸取该溶液10mL，加蒸馏水稀释至100mL，即为10μg·mL－1 的NO3―-N标准液。

5％水杨酸—硫酸溶液配制：称取5g水杨酸先加少量浓硫酸（密度为1.84）溶解后，再加浓硫酸定容至100mL，摇匀，贮于棕色瓶中，置冰箱保存一周有效。

8％氢氧化钠溶液配制：称取20g氢氧化钠溶于250mL蒸馏水中。

5、操作步骤

5.1. NO3―-N标准曲线的制作

5.1.1 取6支10mL刻度试管，编号，按下表配制每管含量为0～10μg的NO3―-N标准液。加入表中试剂后，摇匀。在室温下放置20min后，每管再加入8.6mL 8﹪NaOH溶液，摇匀，使使显色液总体积为10mL。然后以0号管为空白对照，在410nm波长处测定吸光度（A）值。

表39-1 NO3―-N标准曲线配制的参考表

5.1.2 标准曲线绘制

以1～5号管的NO3--N含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。

5.2. 样品中硝酸盐的测定

5.2.1样品液的制备

取一定量的植物叶片剪碎混匀，称取2～3g（三份），分别放入三支20mL刻度试管中，加入10mL蒸馏水，用玻璃泡封口，置于沸水浴中提取30min。到时间后取出，用自来水冷却，将提取液过滤到25mL容量瓶中，并用蒸馏水反复冲洗残渣，最后定容至刻度。

5.2.2样品液的测定

取三支10mL刻度试管，分别加入样品液0.1mL，蒸馏水0.9mL, 5％水杨酸-硫酸溶液0.4mL，混匀后置室温下20min，再慢慢加入8.6mL 8％NaOH溶液，摇匀，使显色总体积为10mL，待冷却至室温后，以标准曲线0号管作空白对照 ，在410m波长处测定吸光度（A）值。

6、结果计算

根据样品液所测得的吸光度（A）值，从标准曲线上查出NO3--N的含量，按下式计算样品中NO3--N含量。

X × 样品提取液总量（mL）

样品中NO3--N含量（μg·g－1）＝----------------------------------------------

样品鲜重（g）×测定时样品液用量（mL）

公式中：X-从标准曲线查得的NO3--N的含量（μg）。