从男性的尿道分泌物或尿中找到滴虫是确诊本病的依据，有三种方法具体如下：1、悬滴检查法，从尿道中采集的分泌物直接涂在玻璃片上，加1-2滴温生理盐水，加盖玻璃，立即置于显微镜下检查毛滴虫，或取第一次晨尿，离心取1-2滴沉渣或前列腺液、精液直接取1-2滴，镜检找毛滴虫，半数以上患者可找到毛滴虫。2、涂片染色法，当悬滴法阴性应作涂片染色检查，分泌物涂在玻璃片上自然干燥，加热、固定，染色镜检。3、培养法，上述两种方法失败，高度怀疑滴虫感染用培养法，常用肝浸液或蛋黄浸液培养，取男性的前列腺液、精液或尿道分泌物培养，阳性率可达90%以上。