对于强直性脊柱炎的确定，主要是根据临床症状、影像学检查以及实验室检查。强直性脊柱炎患者多半都会有骶髂关节炎以及脊柱的无菌性炎症，通常会出现骶髂关节疼痛以及脊柱疼痛。X线上会显示出明确的骶髂关节炎病变，以及脊柱的竹节样改变。在实验室检查上，强直性脊柱炎的患者多伴有HLA-B27血清学的阳性表现，其中阳性率远远大于阴性率。