性激素六项的测定通常建议空腹采血，而且女性建议在月经期的第二天采血，男性没有特殊要求。性激素的分泌在每天中都有一定的波动，通常清晨高于下午，青春期的波动更大，所以建议取血的时间应该标准化，主要是方便前后结果的对比。雌二醇是雌激素中活性最强的一种，睾酮是雄激素中活性最强的一种。